RNA在細(xì)胞內(nèi)極易降解，樣本選擇時(shí)一定要選取新鮮的樣本組織或者取樣后迅速低溫處理（液氮速凍）；樣本出現(xiàn)多次反復(fù)凍融后，RNA得率會(huì)嚴(yán)重下降，也會(huì)導(dǎo)致RNA降解；RNA提取環(huán)境要保持無RNA酶污染；

二：（RNA)如何處理含有微量EDTA的Buffer EB在（RNA）試劑盒中？

試劑盒中Buffer EB（RNA專用）中含有少量EDTA，可能影響下游實(shí)驗(yàn)，使用時(shí)適當(dāng)稀釋，如果用其他洗脫液洗脫，要確保PH>7.5，PH過低影響洗脫效率；

三：(RNA)離心柱漂洗完成后操作注意事項(xiàng)

離心柱漂洗完成后，盡可能烘干柱膜上殘留乙醇，殘留乙醇會(huì)影響洗脫效率和下游實(shí)驗(yàn)效果；柱膜也不建議過度干燥，沒有乙醇味道殘留最好，如果過度干燥可能影響RNA溶解；如果A260/230值過低，說明樣本提取過程中漂洗不徹底，有鹽離子殘留，建議增加漂洗次數(shù)；

四：RNA提取中A260/280比值分析：低于1.9的情況說明什么？

對于RNA提取，A260/280<1.9說明有可能存在DNA污染或者蛋白污染，如果洗脫樣本時(shí)沒有使用Buffer EB，而使用ddH20（確保無RNA酶），比值或偏低，因?yàn)?/strong>Ph值會(huì)影響吸光值，并不表示樣本純度低；

五：如何判斷RNA的完整性

RNA完整性可以通過超微量核酸檢測儀檢測或者瓊脂糖凝膠電泳（電泳條件：膠濃度1%；1XTAE電泳緩沖液）來判斷；一般樣本RNA電泳條帶為兩條帶，對于植物樣本，有可能存在葉綠體RNA干擾，條帶數(shù)量大于4條，并不表示RNA提取發(fā)生降解；

六：如何有效防止RNA污染？

RNA容易受到環(huán)境污染導(dǎo)致RNA嚴(yán)重降解，建議實(shí)驗(yàn)過程中注意更換實(shí)驗(yàn)手套，使用所有耗材應(yīng)該均無RNA酶的一次性耗材；
電泳環(huán)境受到RNA酶污染，也會(huì)造成RNA降解，電泳檢測不準(zhǔn)確，確保電泳過程中電泳緩沖液，上樣緩沖液無RNA酶污染；

七：植物RNA樣本處理量差異的處理方案

對于植物樣本，樣本處理量無法統(tǒng)一確定，對于一般樣本（煙草，擬南芥等），提取量不超過100mg鮮重組織或者20mg干重組織，對于復(fù)雜樣本（水稻，玉米，榆樹等），建議初始樣本量不超過50mg鮮重或者10mg干重組織；如果需要較高的RNA量，可以采取多管濃縮的方法提取RNA;
如果離心時(shí)堵塞離心柱，建議減少初始樣本量；

八：植物RNA樣本提取試劑盒選型指南

RNA提取一般是傳統(tǒng)TRIzol方法和改進(jìn)的柱式方法；對于TRIzol法進(jìn)本可以提取大部分樣本RNA，但是對于多糖多酚植物樣本，建議使用者盡量選擇具有針對性的試劑盒（參見目錄），傳統(tǒng)TRIzol法無法有效去除多糖多酚這些次生代謝物；

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